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试剂配置

  A0.5~1% 的伊红酒精溶液:

  称取伊红Y 0.5~1 g,加少量蒸馏水溶解后,再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤,将滤渣在烘箱中烤干后,以95%酒精(即工业酒精,如果不怕浪费,用无水乙醇配制也可)100毫升溶解。

  B:苏木素染液配方:(配制3000 ml,可按比列减少)

  苏木精 6 g

  无水乙醇 100 ml

  硫酸铝钾 150 g

  蒸馏水 2000 ml

  碘酸钠 1.2 g

  冰醋酸 120 ml

  甘油 900 ml

  配制方法:将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水,溶解后将甘油倾入一起混合,最后加入冰醋酸和碘酸钠。

  C1%盐酸酒精分化液:将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。

染色流程

  (1)二甲苯(Ⅰ) 15min

  (2) 二甲苯(Ⅱ) 15 min

  (3)100%乙醇(Ⅰ) 5min

  (4)100%乙醇(Ⅱ) 5 min

  (5)80%乙醇 5min

  (6)蒸馏水 5 min

  (7)苏木精液染色 5 min

  (8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s

  (9) 1%盐酸乙醇 1-3 s

  (10) 稍水洗 10-30 s

  (13)蒸馏水过洗 1-2 s

  (14) 0.5%伊红液染色 1-3 min

  (15) 蒸馏水稍洗 1-2 s

  (16) 80%乙醇稍洗 1-2 s

  (17) 95%乙醇(Ⅰ) 2-3 s

  (18) 95%乙醇(Ⅱ) 3-5 s

  (19) 无水乙醇 5-10 min

  (20) 石炭酸二甲苯 5-10 min

  (21) 二甲苯(Ⅰ) 2 min

  (22) 二甲苯(Ⅱ) 2 min

  (23) 二甲苯(Ⅲ) 2 min

  (24) 中性树胶封固

  注:①第(10)、(11)步可省去,(12)步冲水时间需延长至20-30min

  ②第(20)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。

  * 冷冻切片HE染色步骤:

  (1)冰冻切片固定 1030 s

  (2)稍水洗 12 s

  (3)苏木精液染色(60℃) 3060 s

  (4)流水洗去苏木精液 510 s

  (51%盐酸乙醇 13 s

  (6)稍水洗 12 s

  (7)促蓝液返蓝 510 s

  (8)流水冲洗 1530 s

  (90.5%曙红液染色3060 s

  (10)蒸馏水稍洗 12 s

  (1180%乙醇 12 s

  (1295%乙醇 12 s

  (13)无水乙醇 12 s

  (14)石炭酸二甲苯 23 s

  (15)二甲苯(Ⅰ) 23 s

  (16)二甲苯(Ⅱ) 23 s

  (17)中性树胶封固。

注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。

染色结果 :细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。

  412 切片脱水透明 切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水。石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。
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